免疫組化染色具體操作步驟

免疫組化染色具體操作步驟介紹
（以美國ZYMED公司SP試劑盒為例）
1、石蠟切片脫蠟至水。
2、3%H2O2室溫孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
3、蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，（如需采用抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。
4、 5~10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時(shí)或4℃。
5、PBS沖洗，5分鐘×3次。
6、滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗（1%BSA-PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~30分鐘。
7、PBS沖洗，5分鐘×3次。
8、滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~30分鐘。
9、PBS沖洗，5分鐘×3次。
10、顯色劑顯色（DAB或AEC）。
11、自來水充分沖洗，復(fù)染，封片。
12、冰凍切片免疫組化染色步驟
13、冰凍切片4~8mm,室溫放置30分鐘后，入4℃丙酮固定10分鐘，PBS洗，5分鐘×3.用3%過氧化氫孵育5~10分鐘，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗，5分鐘×2。