如何快速進行ELISA試劑盒酶免疫測定

ELISA試劑盒由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原，因而免疫測定的使用規模極廣，在臨床查驗中可用于測定：
1) 體液中的各種蛋白質，包括含量很少的蛋白質如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。
5．符號的免疫測定
ELISA試劑盒如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定辦法，抗原抗體反響后直接測定構成的沉積或濁度，敏感度可達5~10μg/ml，但在臨床查驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因而要尋覓增加敏感度的辦法。符號的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質加以符號，經過測定符號物來進步敏感度。在放射免疫測定和中，ELISA試劑盒符號物分別為放射性核素和酶，zui后用測定放射性和酶生機來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉積物進步數百至數千倍。在符號免疫測定中，一般參加過量的符號試劑以確保與待測物*反響。以符號抗體（Ab ※）檢測抗原（Ag）為例，反響式如下：
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反響產品中有與Ag結合的Ab※和游離和Ab※ ，如不將兩者別離而測定符號物，測得的成果將為兩者之和。因而，游離符號物與結合符號物的別離是符號免疫測定中的重要進程。可采用多種手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與符號的抗原或抗體直接反響，結合的符號物被固定在載體上，而游離的符號物留于溶液中。這樣能夠經過洗刷將游離的Ab※除掉，結合符號物的測定可在固相上進行。IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因而IgM抗體的測定，對某些流行癥如甲型肝炎有較高的臨床確診價值。
1.3 抗原抗體反響
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結合構成抗原抗體復合物的進程是一種動態平衡，其反響式為：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結合力，能夠用平衡常數K表明：
K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
ELISA試劑盒高親和力抗體的抗原結合點與抗原的決定簇在空間構型上十分適合，兩者結合結實，不易解離。解離后的抗原或抗體均能堅持原有的結構和活性，ELISA試劑盒因而可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，使用于免疫測定中可得到更好的效果。